我們采用免疫組織化學(xué)方法對35例腰椎間盤突出癥患者的退變腰椎間盤及11個(7例)正常腰椎間盤組織中Fas APO-1 蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，探討其在腰椎間盤退變及突出癥發(fā)生、發(fā)展中的作用。

　　一、材料與方法

　　1.標(biāo)本來源：退變腰椎間盤組織(L1～5)取自本院骨科1998年5月～1999年1月間35例經(jīng)手術(shù)治療的腰椎間盤突出癥患者，其中男20例，女15例，年齡20～69歲，平均40.0歲。術(shù)中取纖維環(huán)及髓核組織各1塊，標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)檢查證實為退變椎間盤。11個(7例)正常椎間盤組織(L1～5)做為對照，標(biāo)本取自新鮮尸檢，年齡22～59歲，平均36.8歲。以上標(biāo)本離體后用福馬林固定48 h，石蠟包埋，4 μm厚切片，用于免疫組織化學(xué)染色。

　　2.方法：檢測Fas APO-1蛋白表達(dá)所用一抗為親和純化的兔抗人Fas APO-1多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，所有標(biāo)本均在同一條件下采用鏈菌素親生物素蛋白-過氧化酶連接法(LSAB)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，一抗稀釋度為1∶50。各步驟間均用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗片。Fas APO-1陽性對照選用經(jīng)病理確診為淋巴瘤的石蠟切片，用PBS代替一抗為陰性對照。

　　3.結(jié)果判斷：Fas APO-1蛋白表達(dá)以細(xì)胞膜及胞漿出現(xiàn)棕黃色染色為陽性細(xì)胞，切片內(nèi)染色陽性細(xì)胞率小于20%為陰性顯色，大于20%為陽性顯色，陽性顯色者按細(xì)胞著色的強度和范圍分為＋、++、+++ 3個級別。每例切片雙盲法計數(shù)細(xì)胞數(shù)最低不少于400個。

　　4.統(tǒng)計學(xué)方法：資料分析采用χ2檢驗。

　　二、結(jié)果

　　腰椎間盤組織中Fas APO-1蛋白表達(dá)部位在軟骨樣細(xì)胞。本實驗共檢測35例，其胞膜及胞漿出現(xiàn)棕黃色染色。其他組織細(xì)胞未見Fas APO-1蛋白表達(dá)。退變腰椎間盤組織Fas APO-1蛋白表達(dá)陽性率為85.71%，正常組陽性率36.36%，統(tǒng)計學(xué)分析2組間Fas APO-1蛋白表達(dá)陽性率及表達(dá)強度差異均有顯著性(P＜0.05)。退變腰椎間盤纖維環(huán)組織Fas APO-1蛋白陽性表達(dá)率為88.57%，髓核組織陽性表達(dá)率為85.71%，差異無顯著性(P＞0.05)，表達(dá)強度差異無顯著性(P＞0.05)。

　　三、討論

　　腰椎間盤退行性變是導(dǎo)致腰椎間盤突出癥的基本病因，退變腰椎間盤主要病理改變?yōu)樽甸g盤細(xì)胞數(shù)量減少及椎間盤基質(zhì)的降解［1］。成人腰椎間盤的細(xì)胞成分主要是軟骨樣細(xì)胞，它通過合成、分泌細(xì)胞外大分子基質(zhì)來維持椎間盤的正常生理功能。當(dāng)軟骨樣細(xì)胞死亡增加，其合成細(xì)胞外基質(zhì)的能力下降，不能有效地維持椎間盤基質(zhì)的膠體滲透壓，從而導(dǎo)致椎間盤脫水及退變。細(xì)胞死亡有兩種基本方式，即細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，人類腰椎間盤組織中存在凋亡的軟骨樣細(xì)胞［2］。Fas相對APO-1基因為細(xì)胞凋亡基因的典型代表，F(xiàn)as APO-1基因產(chǎn)物Fas APO-1蛋白是相對分子質(zhì)量為45×103的跨膜糖蛋白，屬神經(jīng)生長因子與腫瘤壞死因子受體超家庭成員，是一個細(xì)胞凋亡信號受體，它與Fas APO-1抗體或配體(fas ligand,FasL)結(jié)合后，其胞漿區(qū)經(jīng)特殊胞內(nèi)蛋白質(zhì)介導(dǎo)，直接激活凋亡基因產(chǎn)物，可以誘導(dǎo)Fas APO-1蛋白所在細(xì)胞的凋亡［3］，當(dāng)Fas APO-1系統(tǒng)的功能增強時，可導(dǎo)致組織細(xì)胞破壞的加劇。細(xì)胞膜表達(dá)有功能的Fas APO-1蛋白并且其表達(dá)量達(dá)到一定強度是通過Fas APO-1途徑誘導(dǎo)凋亡作用的首要條件。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)as APO-1蛋白在關(guān)節(jié)軟骨的軟骨細(xì)胞膜上表達(dá)，用抗Fas APO-1抗體作用于骨關(guān)節(jié)炎患者的軟骨細(xì)胞，可導(dǎo)致軟骨細(xì)胞凋亡，并認(rèn)為軟骨細(xì)胞凋亡是關(guān)節(jié)軟骨退變的主要病因［4］。本實驗結(jié)果表明，腰椎間盤組織中Fas APO-1蛋白表達(dá)在軟骨樣細(xì)胞，F(xiàn)as APO-1蛋白在退變腰椎間盤組織中表達(dá)率較高，表達(dá)較強，因此，組織細(xì)胞在Fas APO-1蛋白表達(dá)較高的情況下，可能進(jìn)行超常的凋亡，從而破壞了細(xì)胞增殖與凋亡的動態(tài)平衡，這可能是腰椎間盤退變發(fā)生及進(jìn)展的原因之一。

　　參考文獻(xiàn)

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　　2，Gruber HE，Hanley EN.Analysis of aging and degeneration of the human intervertebral disc:Comparison of surgical specimens with normal controls. Spine, 1998,23:751-757.

　　3，Nagata S,Golstein P.The Fas death factor. Science, 1995,267:1449-1456.

　　4，Hashimoto S,Setarreh M.Fas/Fas ligand expression and inducation of apoptosis in chondrocytes.Arthritis Rheum, 1997,14:1749-1755.