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亞葉酸鈣主要是用于甲氨蝶呤的解救，它參與多種的代謝反應，比如對于嘌呤、嘧啶和氨基酸的代謝都具有較為重要的調控作用。亞葉酸鈣在臨床上主要可以用于細胞毒治療中的解毒治療，適合用于高劑量的甲氨蝶呤患者的后續解毒治療，還可以用于由治療甲氨蝶呤過量使用所導致的不良反應。亞葉酸鈣還可以和氟尿嘧啶聯合用于結直腸癌的患者，還可以用于巨幼細胞性貧血的患者，主要用于葉酸治療效果不佳的巨幼細胞性貧血，但是不適合用于維生素B12缺乏的貧血。總之亞葉酸鈣最主要的作用是用于甲氨蝶呤的解毒。