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室間隔缺損多數是產科醫生、兒科醫生以及兒童保健科醫生，在進行體格檢查時發現，因此心臟聽診對疾病的發現較為重要。聽診需要按照逆時針依次進行，室間隔缺損的聽診區，主要位于胸骨左緣。 聽診時若缺損位置稍高，可在2-3肋間聞及比較響亮的雜音，多見于動脈主干下行的室間隔缺損。若缺損位置較低，可在3-4肋間聞及明亮雜音，多為膜周部室間隔缺損。臨床上較小室間隔缺損若未聞及心臟雜音，可通過心臟彩超檢查確診。