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梅毒確診最常用的方法是梅毒血清學試驗，根據所使用的抗原不同，分非梅毒螺旋體抗原血清試驗和梅毒螺旋體血清試驗。不同實驗室出結果的時間會有所不同，一般為3-7天。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗的敏感性比較好，但特異性差，妊娠期婦女、老年人、惡性腫瘤患者會出現假陽性。梅毒螺旋體血清試驗是針對梅毒螺旋體特異性抗原蛋白產生的抗體，敏感性和特異性比較高。其他輔助檢查包括暗視野顯微鏡檢查、腦脊液檢查、影像學檢查和皮膚組織病理學檢查，檢查所需的時間一般是2-5天。以上檢查不是確診早期梅毒的必要檢查，但腦脊液檢查在神經梅毒診斷中是必須做的檢查。