1．精子穿透毛細玻璃管試驗

　　這一試驗是由Kremer首先創(chuàng)造并設計了Kremer精子穿透計。其基本原理是采用一根長10cm，內徑為0。2-1。2mm的圓柱形毛細玻璃管，管內充滿介質，毛細管一端用膠泥封口，另一端插大容量為0。5ml的精液池內，將穿透計置37℃恒溫水浴箱中孵育1小時，取出置顯微鏡下觀察并記錄精子穿透高度，試驗結果的評價標準有二種：

　　（1）1小時后觀察毛細玻璃管內領先精子到達的高度（mm），以游動的活精子為止點。

　　（2）世界衛(wèi)生組織推薦的方法：評價時間可為10分鐘，30分鐘，3小時或24小時。評價內容包括：

　　1）穿透深度：領先精子的高度（mm）。

　　2）穿透密度：選擇精子最多的一段毛細管，計算其中的精子數(shù)。

　　3）活動力：按毛細管上1/3段中精子的前向運動分為0-Ⅲ級。

　　0級：無前向運動；

　　Ⅰ級：前向運動精子占25%；

　　Ⅱ級：前向運動精子占25％-50%；

　　Ⅲ級：前向運動精子>50%。

　　常用來作穿透試驗的介質有以下幾種：

　　①正常排卵期宮頸粘液：取材應為婚后近期內有生育史的婦女，身體健康，無生殖系統(tǒng)炎癥。粘液的物理性狀正常，粘滯性低，干燥后有羊齒狀結晶形成。由于正常排卵期婦女宮頸粘液取材不易，一次用不完的粘液可貯存于試管中，管口用石蠟紙封閉，避免脫水，放入4℃冰箱保存，1周內仍可使用。

　　②動情期母牛宮頸粘液：其來源較人的容易且量多，國外文獻報道牛的粘液的物理性狀、顏色、拉絲度、彈性等與人相似，干燥后也可見羊齒狀結晶，可以代替人的宮頸粘液。在取材時應先消毒牛的外陰，取得的粘液須經物理檢查和穿透鑒定后方可使用。牛的宮頸粘液可保存于4℃冰箱，1周內仍可使用。

　　③精子營養(yǎng)液加白蛋白液：NaC17．721g，果糖1g，KH2PO40．136g，MgSO4　0．247g，Na2HPO4　3．581g，加蒸餾水至1000ml，調pH至7．4，存放4℃?zhèn)溆谩Ｓ脮r取25%人體血清白蛋白1ml，加入6ml精子營養(yǎng)液混勻后即可使用。也有用150mg牛血清白蛋白溶于5ml精子營養(yǎng)液中做為穿透介質。

　　④雞蛋清：新鮮雞蛋黃周圍較清稀部分的蛋清也是很好的穿透介質。蛋清的物理性狀同排卵期婦女的宮頸粘液相似，透明無色，有粘滯性，內含多種蛋白質及有機物，精子在蛋清介質中穿透自由。

　　為保證試驗結果的準確可靠，應注意以下幾點：精液要求新鮮，禁欲5天，取精液后讓其液化，1小時內做穿透試驗；穿透介質要新鮮可靠，不可有污染；毛細管頂端裝入介質并封閉后應靜置10分鐘，無氣泡后才能使用，因氣泡阻止精子前向運動；檢測時系統(tǒng)的溫度應保持恒溫37℃。

　　2．精子穿透粘液玻片試驗

　　這一試驗的優(yōu)點是方法簡單，主要用于比較宮頸粘液質量，診斷由于宮頸粘液粘稠所致的不孕，鑒別夫妻間不孕不育的原因，于人工授精時了解受試者粘液性質以及測試粘液質量。

　　取一載玻片，將排卵期宮頸粘液一滴滴于載玻片上，在距其4mm處另外滴一滴液化好的精液，用蓋玻片輕輕蓋上，使兩個標本恰好接觸，而又不重疊，然后在37℃條件孵育10-15分鐘，鏡下分析即可。正常情況下，于15分鐘即可見有多數(shù)精子進入粘液滴內，進入的方式是通過一個領先精子首先突破阻力，其余精子由診通道循序魚貫而入，在粘液內自由活動。當精子或粘液任一方有異常時，精子不能通過兩個標本液體接觸界面進入粘液，而是呈扇形分布。

　　3．性交后試驗

　　本試驗是通過觀察性交后若干小時內宮頸粘液中活動的精子數(shù)，以評價精子功能。試驗時首先根據(jù)基礎體溫，宮頸粘液，超聲波等項檢查確定排卵期，時間應掌握在宮頸粘液將有羊齒狀結晶出現(xiàn)時進行。試驗前禁欲3天，性交后分別于2、4、6、10小時取宮頸粘液作顯微鏡檢查。用吸管或不帶針頭的注射器分別吸取陰道后穹窿、宮頸口、宮頸管的粘液標本。

　　穹窿部的標本中精子常在2小時后失去活動能力，檢查穹窿部標本的目的在于查明精子是否進入陰道。宮頸口標本在正常情況下每高倍視野有20個以上活動力為Ⅱ-Ⅲ級的精子，如果每一視野下出現(xiàn)10個以上Ⅲ級前向直線運動的精子，也可表示正常。宮頸管標本在性交后6-10小時內檢查，正常每高倍視野內有10-15個以上活動力在Ⅱ-Ⅲ級的精子，這一段時間是確定精子在宮頸粘液活力及壽命的理想時間。

　　宮頸粘液正常，而性交后試驗異常者應考慮以下因素：①性交因素：性交方法錯誤，精液未排入陰道或不射精；②陰道因素：由于陰道炎癥感染或pH改變使排入陰道內的精子失活；③精液因素：少精子癥，精液量少，液化不良，或精漿異常引起精子活力下降；④宮頸因素：宮頸管解剖異常，粘連狹窄，子宮頸炎癥，感染及宮頸粘液存在精子抗體；⑤其他因素：試驗時間不合適，為非排卵期，宮頸粘液黃而稠厚，羊齒狀結晶不典型。

　　4．精子穿透倉鼠卵試驗

　　Yonagimachi于1976年首先報道了去透明帶倉鼠卵人精子穿透試驗，經過近十幾年的發(fā)展，該方法現(xiàn)已被廣泛用于檢測評價人精子的受精能力。這一技術適用于分析精子的受精能力，異常精液者治療后的療效觀察，人工授精標本的質量評價以及體外受精前評價丈夫或供精者的精子質量。